西瓜枯萎病不同发病阶段根际微生物群 落结构分析

何英; 张屹; 朱菲莹; 肖姬玲; 魏林; 唐炎英; 梁志怀; 《农业科学与技术(英文版) 》 2020

摘要：通过高通量测序分析西瓜枯萎病不同发病阶段根际土壤微生物群落结构,以探明根际微生物优势菌群在西瓜枯萎病发生过程中差异.以种植前土壤(CK1),发病高峰期土壤(CK2),发病稳定期土壤(CK3)样品,利用Illumina-Hiseq高通量测序平台对根际土壤进行16S和ITS rDNA测序分析.结果显示:根际土壤细菌多样性表现为CK1>CK3>CK2,其中CK1与CK3之间无显著性差异,与CK2之间差异性显著,在属水平上,发病高峰期主要富集优势细菌群有Mizugakiibacter(21.9299%)、罗河杆菌属(Rhodanobacter,5.0933%)、乳杆菌属(Lactobacillus,3.1921%).根际土壤真菌多样性表现为CK1>CK3>CK2,三者呈显著差异性;在属水平上,发病高峰期主要富集优势真菌群有散尾鬼笔属(Lysurus,54.4601%)、 团丝核菌属(Papulaspora,12.4252%)、端梗孢属(Acrophialophora,3.1729%).试验结果表明,西瓜枯萎病发病高峰期土壤中细菌、真菌的多样性及丰富度均有下降,随着发病逐渐稳定,根际土壤中细菌、真菌多样性和丰富度得到一定程度的恢复.

关键词： 西瓜枯萎病 土壤细菌多样性 土壤真菌多样性 高通量测序

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生物有机肥对土壤微生物群落结构变化及西瓜枯萎病的调控

朱菲莹; 张屹; 肖姬玲; 魏林; 梁志怀; 《微生物学报 》 2019 北大核心 CSCD

摘要：【目的】研究施用生物有机肥处理土壤后对西瓜枯萎病发生的影响,明确可能与西瓜枯萎病发病密切相关的土壤微生物群落结构。【方法】设置2组不同年份材料对比,依次为施用生物有机肥后2016年发病期(CK2016、T12016)和2017年发病期(CK2017、T12017)。基于16S r RNA序列测定,利用Illumina Miseq高通量测序平台对施用生物有机肥后不同年份的土壤微生物群落组成和差异进行测序分析。【结果】试验结果发现,不同年份的土壤微生物群落中alpha多样性指数并无明显的差异,但是施用生物有机肥后的土壤相比对照土壤中细菌群落多样性略有增高。不同年份土壤细菌群落结构在门水平上差异不显著,其中变形菌门和硬壁菌门是构成这两个年份土壤细菌的重要组成部分,同时也是比较稳定的微生物类群。在属水平上分析发现主要动态变化菌属为芽孢杆菌属、肠球菌属、乳球菌属及水恒杆菌属。通过Spearman分析发现它们与西瓜枯萎病发生率的关系均为负相关。【结论】施用生物有机肥可帮助西瓜连作土壤的生态修复,对枯萎病防治起到一定的作用。通过对施用生物有机肥的不同年份土壤微生物种群结构动态变化及对枯萎病发生率呈正负相关的微生物菌属的分析研究,为如何利用调节土壤微生物群落结构来防治西瓜枯萎病提供了新的思路。

关键词： 西瓜 土壤微生物群落 生物有机肥 高通量测序 枯萎病

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哈茨木霉T2-16突变体库的构建及突变株表型分析

何英; 张屹; 肖姬玲; 朱菲莹; 魏林; 梁志怀; 《安徽农业大学学报 》 2019 CSCD

摘要：为了优化高效拮抗生防菌哈茨木霉T2-16的EMS诱变条件,构建哈茨木霉T2-16突变体库,为哈茨木霉功能基因组研究奠定材料基础,以哈茨木霉T2-16为试验材料,采用单因素试验以0～0.6 mol·L~(-1 )EMS溶液分别处理不同浓度孢子0～6 h,明确适于哈茨木霉诱变的EMS最佳浓度、处理时间和孢子浓度。以最适参数诱变处理野生型菌株,进行生长势、拮抗能力和生防效果比较。结果显示,0.4 mol·L~(-1 )EMS溶液处理浓度为10~6·mL~(-1)的孢子4 h,其致死率接近70%,诱变效果最佳。经生长势、拮抗能力和生防效果比较发现,生长势呈正向突变占有率达46.20%,其中,16株突变菌株拮抗作用明显增强,T42和T62的生防效果分别高出野生型菌株31.64%和27.91%,为研究哈茨木霉与生防相关的功能基因打下基础。

关键词： 哈茨木霉T2-16 EMS诱变 突变体库 表型分析

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哈茨木霉T2-16的GFP标记及其生防特性

田程; 张屹; 肖姬玲; 朱菲莹; 唐炎英; 魏林; 梁志怀; 《中国生物防治学报 》 2019 北大核心 CSCD

摘要：优化高效拮抗生防菌哈茨木霉T2-16的转化条件,筛选出与野生型菌株具有相似生防特性的阳性转化子,为生防木霉菌T2-16的定殖动态、分布规律等研究打下基础。通过PCR和分子克隆技术构建具有G418抗性基因的绿色荧光(GFP)表达载体pKN-sGFP,利用PEG-CaCl_2介导的原生质体转化法,获得强荧光表达的哈茨木霉T2-16转化子,并将其与野生型菌株的生物特性进行比较,筛选出与野生型菌株具有相似生防特性的阳性转化子。试验结果显示,哈茨木霉T2-16在20℃培养条件下对1000μg/mL G418敏感,在上述优化条件下,转化获得稳定遗传的阳性转化子TG2-10;进一步比较其与野生型菌株的生物特性发现,两者之间无明显差异,可用于下一步哈茨木霉T2-16生防机理的研究。

关键词： 哈茨木霉 绿色荧光蛋白 载体构建 生防效果

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西瓜枯萎病不同发病阶段根际微生物群落结构分析

何英; 张屹; 朱菲莹; 肖姬玲; 魏林; 唐炎英; 梁志怀; 《湖南农业科学 》 2019

摘要：通过高通量测序分析西瓜枯萎病不同发病阶段根际土壤微生物群落结构,以探明根际微生物优势菌群在西瓜枯萎病发生过程中的差异.以种植前土壤(CK1),发病高峰期土壤(CK2),发病稳定期土壤(CK3)样品,利用Illumina-Hiseq高通量测序平台对根际土壤进行16S和ITS rDNA测序分析.结果显示:根际土壤细菌多样性表现为CK1>CK3>CK2,其中CK1与CK3之间无显著性差异,与CK2之间差异性显著,在属水平上,发病高峰期主要富集优势细菌群有Mizugakiibacter(21.9299%)、罗河杆菌属(Rhodanobacter,5.0933%)、乳杆菌属(Lactobacillus,3.1921%).根际土壤真菌多样性表现为CK1>CK3>CK2,三者呈显著差异性,在属水平上,发病高峰期主要富集优势真菌群有散尾鬼笔属(Lysurus,54.4601%)、团丝核菌属(Papulaspora,12.4252%)、端梗孢属(Acrophialophora,3.1729%).试验结果表明,在西瓜枯萎病发病高峰期根际土壤中细菌、真菌的多样性及丰富度均有所下降,随着发病逐渐稳定,根际土壤中细菌、真菌多样性和丰富度得到一定程度的恢复.

关键词： 西瓜枯萎病 土壤细菌多样性 土壤真菌多样性 高通量测序

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不同施肥处理对土壤微生物群落结构及西瓜枯萎病发生的影响

朱菲莹; 田程; 张屹; 肖姬玲; 魏林; 梁志怀; 《中国生物防治学报 》 2018 北大核心 CSCD

摘要：研究不同肥料组合对西瓜枯萎病发生的影响,寻找与西瓜幼苗发病密切相关的菌群种类。设置3组不同土壤肥料组合,依次为对照组CK、T1、T2。利用Illumina Miseq高通量测序平台对试验组和对照组之间的土壤微生物群落组成在16S r DNA水平上进行测序分析。通过对测序结果在OTU和种群相对丰度的计算和分析发现,CK组中平均共获得28986条序列,T1组中平均共有30308条序列,T2组中平均共有29730个条序列;三组共有细菌OTU数量为860,占各组分平均总OTU数量的50%以上,其中芽胞杆菌属Bacillus、肠球菌属Enterococcus、乳球菌属Lactococcus、梭菌属Clostridium在T1组中相对丰度最高;而2种未知细菌unclassified_TM7-1(c)和unclassified_Ellin329(o)在T2组中的相对丰度值最高。西瓜枯萎病发病率情况为CK>T1>T2,施用棉隆+生物有机肥可以通过重建土壤生态环境,提高土壤细菌多样性,从而对西瓜枯萎病有显著的防治作用。

关键词： 西瓜 土壤微生物群落 生物有机肥 16S rDNA 枯萎病

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西瓜枯萎病菌遗传多样性的相关序列扩增多态性分析

肖姬玲; 张屹; 朱菲莹; 魏林; 梁志怀; 《植物保护 》 2018 北大核心 CSCD

摘要：对30个西瓜枯萎病菌Fusarium oxysporum f.sp.niveum菌株基因组DNA进行相关序列扩增多态性(SRAP)分子标记分析,以探究其遗传多样性与地理来源的关系。采用尖孢镰刀菌西瓜专化型Fusarium oxysporumf.sp.niveum0、1、2号生理小种的基因组DNA为模板,对225对SRAP引物进行筛选,筛选出20对多态性、重复性较好且条带清晰的引物,对30个菌株进行PCR扩增,共扩增出386条带,其中多态性条带有371条,多态性比率为96.11%,平均每对引物扩增出19.3个位点和18.55个多态性位点。UPGMA法聚类分析结果显示,供试菌株两两之间的遗传相似系数范围为0.69~0.90,平均为0.79,说明尖孢镰刀菌西瓜专化型的遗传多样性较为丰富。基于SRAP标记聚类分析表明,30个菌株在遗传相似系数为0.70处被划分为3个类群,I类群包含24个菌株,其中18个来自湖南省,Ⅱ类群只包含1个来自黑龙江省哈尔滨市的菌株,它和另一个来自黑龙江地区的菌株被划分到不同的类群,且遗传距离相对较远;Ⅲ类群包含了5个菌株,其中3个来自海南三亚,其余两个来自湖南省。根据菌株的分布情况来看,菌株的聚集与地理来源没有明显的相关性。

关键词： 西瓜枯萎病菌 SRAP分析 遗传多样性

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实时荧光定量PCR检测土壤西瓜枯萎病菌体系的建立

肖姬玲; 张屹; 李基光; 朱菲莹; 魏林; 梁志怀; 《植物保护学报 》 2018 北大核心 CSCD

摘要：西瓜枯萎病是由尖孢镰刀菌西瓜专化型(Fusarium oxysporum f.sp.niveum,FON)引起的一种土传维管束病害,在各个时期均可发生,对西瓜产业构成严重威胁。该病具有传播途径多样、暴发快速、应急防治难等特点,因此及时准确监控土壤中的病原菌是防治西瓜枯萎病的关键。实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,q PCR)技术能进行定量

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土壤施加氧化钙对西瓜枯萎病的影响及其机理初探

邱婷; 张屹; 肖姬玲; 李基光; 朱菲莹; 魏林; 梁志怀; 《植物保护 》 2017 北大核心 CSCD

摘要：为探明土壤撒施石灰对西瓜枯萎病发生的影响,本试验设计5个浓度剂量的氧化钙对连作西瓜5年的土壤进行消毒处理,通过栽培感病品种并调查植株生长情况、枯萎病发病率等指标,结合土壤中尖孢镰刀菌西瓜专化型1号小种病原菌孢子量和土壤pH的变化动态,以此评估土壤施加石灰防治西瓜枯萎病的效果,并利用不同浓度的钙对尖孢镰刀菌西瓜专化型菌丝生长和产孢量的影响进行防治机理的初步研究。试验结果表明,当土壤施加氧化钙后,西瓜发病率显著降低,各处理的相对防效分别为14%、57.8%、96.3%、94.7%、94.7%。在定植10d后,各处理均有促进植株生长发育的作用,其中1.34g/kg最显著。而随着氧化钙施加量的增加,土壤pH值也不断提高,30d趋于稳定。对土壤病原菌孢子数量检测表明:各处理土壤中病原菌数量均呈现显著降低的趋势。PDA平板生测结果表明,当钙离子浓度高于80mmol/L时,病原菌的生长及产孢量开始受到抑制,随着浓度的增加,抑制作用加强。土壤施加氧化钙不仅能改善土壤的酸化,还能有效防控西瓜枯萎病,其机理可能是土壤pH值的提高改变了土壤微环境,不利于病原菌侵染;施加的钙离子抑制了病原菌菌丝的生长及孢子的萌发。研究结果对揭示氧化钙防控西瓜枯萎病机制,具有一定的参考价值。

关键词： 西瓜 氧化钙 枯萎病 尖孢镰刀菌西瓜专化型

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腐殖质对环境影响及其降解研究进展

肖姬玲; 张屹; 李基光; 朱菲莹; 魏林; 梁志怀; 《湖南农业科学 》 2017

摘要：腐殖质是一类重要的地表有机物质,对环境有着很重要的影响。综述了腐殖质的结构性质及其对环境的影响,并总结了腐殖质光化学降解、臭氧降解及生物降解的3种类型、降解的影响因素及其降解后对环境的影响,最后对腐殖质降解技术以及今后重点研究方向作出了展望。

关键词： 腐殖质 结构性质 降解类型 环境影响

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